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技術原理

基因擴增儀的工作原理以及PCR儀的分類

作者:熒光定量PCR儀???發布時間:2021-11-03

    基因擴增儀的工作原理

    PCR(Polymerase Chain Reaction)技術,中文譯為聚合酶鏈式反應,是一種在體外(試管、切片…)擴增核酸的技術。PCR的基本反應包括以DNA為模板的反應和以mRNA為模板的反應。

    PCR技術是模擬體內天然DNA(脫氧核糖核酸)的復制過程。以擴增DNA為例,其基本原理是在模板、引物、4種dNTP和耐熱DNA聚合酶存在的條件下,特異擴增位于兩段已知序列之間的DNA區段的酶促合成反應。

    PCR儀的分類

    PCR儀(基因擴增儀)一般有四種類型:分別是普通基礎PCR儀,梯度PCR儀,實時熒光定量PCR儀原位PCR儀。
    pcr儀

    這四種PCR儀的一般原理有相似的地方,但在結構和配件方面還存在一些差異。

    (1)普通基礎PCR儀由主機,加熱模塊,PCR管樣品基座,熱蓋,控制軟件組成。

    (2)梯度PCR儀除具有普通PCR儀的結構外,還具有特殊的梯度模塊,可實現對梯度溫度和梯度時間等參數的調整。因此可以在一次實驗中對不同樣品設置不同的退火溫度和退火時間,從而可在短時間內對PCR實驗條件進行優化,提高PCR科研效率。

    (3)實時熒光定量PCR儀在普通PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統。熒光檢測系統主要包括激發光源和檢測器。激發光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發光二極管LED光源,前者可配多色濾光鏡實現不同激發波長,而單色發光二極管LED價格低、能耗少、壽命長,不過因為是單色,需要不同的LED才能更好地實現不同激發波長。監測系統有超低溫CCD成像系統和PMT光電倍增管,前者可以一次對多點成像,后者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品,需要通過逐個掃描實現多樣品檢測,對于大量樣品來說需要較長的時間。

    (4)原位PCR儀與普通PCR儀相比,用玻片代替了PCR管,其反應過程是在載玻片的平面上進行的。

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