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技術原理

2017檢測和校準實驗室能力認可準則在基因擴增檢測領域的應用說明

作者:CNAS-CL62???發布時間:2020-07-24

    前言

    本文件是中國合格評定國家認可委員會(英文縮寫:CNAS)根據基因擴增檢測領域的特性而對 CNAS-CL01:2006《檢測和校準實驗室能力認可準則》所作的進一步說明,并不增加或減少該準則的要求。本文件需與 CNAS-CL01:2006《檢測和校準實驗室能力認可準則》同時使用。在結構編排上,本文件章、節的條款號和條款名稱均采用 CNAS-CL01:2006中章、節的條款號和條款名稱,對 CNAS-CL01:2006 應用說明的具體內容在對應條款后給出。實驗室需注意:符合本應用說明并不意味著滿足所有檢測標準的要求。實施檢測時,個別檢測標準可能還有某些特殊要求。

    1 范圍

    1.2 本應用說明適用于從事基因擴增檢測領域實驗室的認可活動,本應用說明中的基因擴增方法主要用于轉基因檢測、動植物源性成分鑒定、過敏原檢測、物種分子鑒定、功能基因檢測等,該領域涉及植物學、動物學、微生物學、病毒學、人類學、古生物學、藻類學、昆蟲學等。

    1.5 各個專業領域如果有相應的法律法規和/或相應的資質要求等,不包含在本應用說明中。注:如司法鑒定對實驗室資質的要求和醫學檢驗領域對相關機構的特殊要求等。

    3 術語和定義

    基因擴增(gene amplification):通過生物體外試驗的方法,為某一特定的基因的拷貝數選擇性地增加而其它基因并未按比例增加的過程(僅適用本應用說明,不包括自然基因擴增),即以擴增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術。

    4 管理要求

    4.1 組織

    4.1.2 實驗室不得從事法律禁止的活動,包括不允許發布在國家法律法規禁止范圍內的檢測結果,有責任和義務保護本國的物種信息資源和基因資源。

    4.1.5 c)應有措施對檢測結果和檢測中獲得的信息或個人隱私保密,如:樣品及其相關的遺傳信息等保密。

    4.1.5 h) 實驗室技術管理者中必要時應包括一名具有豐富的基因擴增檢測經驗和相關知識的人員,應具有分子生物學專業或與所從事檢測專業范圍密切相關的

    本科以上學歷和五年以上分子生物學檢測的工作經歷。

    4.2 管理體系

    4.2.1 針對基因擴增檢測領域的基礎性和前瞻性,應建立與其活動范圍相適應的

    管理體系。

    4.3 文件控制

    4.3.3.4 應制定程序來描述如何更改和控制保存在計算機系統中的文件,尤其是結果的處理軟件。注:在科學研究領域,大量的數據是通過計算機來采集、并通過計算機軟件來處理、匯總和輸出檢測報告的,計算機軟件的發布、更改(更新)、受控就顯得特別重要。

    4.4 要求、標書和合同的評審

    4.4.1a)對包括所用方法在內的要求應予規定,并充分考慮國家法律法規及倫理道德的要求。形成文件,并易于理解;適用時,應包括客戶的要求或標書與合同之間的任何差異、任何變化的動態管理。

    注:基因擴增領域具有探索性,在實際檢測工作中經常根據前期的檢測結果確定下一步的檢測工作,也就是說合同可能處于變化過程中,因而對合同要實施動態管理。

    4.4.1b)實驗室應根據客戶樣品的信息,如樣品類型及樣品的處理程度,確定此技術在該樣品的適用性。

    4.4.5 當核酸提取或基因擴增無法完成時,應向客戶做出說明。

    4.5 檢測和校準的分包

    4.5.1 如基因擴增后需要進行測序,該測序工作應優先分包給已獲認可的權威專業技術機構來進行(但專門的基因測序實驗室的測序工作不能分包)。

    4.6 服務和供應品的采購

    4.6.2 應制定文件驗證所有環節,包括分子生物學試劑和分析軟件等是否符合預期性能;尤其要對影響結果質量的重要供應品、試劑和消耗性材料進行技術性驗收。用于基因擴增前處理的試劑應不含干擾檢測結果成分。適用時,提取緩沖液或溶液使用前應采用適當方式滅菌。應遵循前處理的注意事項或試劑的使用說明(包括試劑對聲、光、熱及化學物質的穩定性信息等)并形成相應記錄。實驗室配制的試劑應貼好標簽,并在標簽上注明試劑名稱、容量、溶劑類型、配制及使用日期和/或保質期。若試劑有特殊使用說明、有毒有害提示或使用限制也應在標簽上注明。所用 Taq 聚合酶/反應預混液/試劑盒/引物和探針在使用前應進行性能驗證。引物應通過核酸陽性物質及陰性物質驗證其性能,并出具證明證實引物的性質或序列。

    4.6.3 采購文件中應包括對服務和供應品性能的技術要求。

    4.6.4 實驗室應優先選擇已經獲得產品認證和/或質量管理體系認證的供應商提供的產品。實驗室也可以通過調查或實地考察的方式進行合格供應商的評價,證明供應商的組織能力、技術能力,并保存對其評價的記錄。

    4.7 服務客戶

    4.7.1 實驗室在確保其他客戶信息機密的前提下,可允許客戶或其代表合理進入實驗室的相關區域,還應考慮法律法規、樣品安全、人身安全、污染防范等因素。

    4.9 不符合工作的控制

    4.9.1 實驗室應制定污染處理文件。污染一旦發生,應立即停止檢測工作,并評價是否對檢測結果造成影響。應確保所有檢測人員能夠識別污染的發生,并執行不符合工作程序。

    4.13 記錄的控制

    4.13.2 實驗室應有程序確保電子記錄的安全性和完整性,并定期進行備份和殺毒處理,應授權專門人員負責電子記錄的保存、使用、傳輸、審核以及維護等。檢測記錄應按照標準要求給出空白對照、陰性對照和陽性對照等檢測結果。

    5 技術要求

    5.2 人員

    5.2.1 實驗室工作人員應具備以下條件:

    - 應熟悉生物檢測安全知識和消毒知識;

    - 應得到與其工作內容相適應的培訓,具備相應的實際操作技能;

    - 當實驗室使用數據庫軟件、專業分析軟件對檢測的結果進行檢索、處理時,對檢測報告中所含意見和解釋負責的人員必須對相關軟件性能、操作等有充分的

    了解。

    - 所有專業技術人員應有相關專業的教育經歷。

    - 授權簽字人應具有相關專業本科以上學歷,且在本專業領域工作 5 年以上或具有同等能力。

    注:博士研究生畢業,從事相關專業檢驗檢測工作 1 年及以上;碩士研究生畢業,從事相關專業檢驗檢測工作 3 年及以上;大學本科畢業,從事相關專業檢驗檢測工作 5 年及以

    上;大學??飘厴I,從事相關專業檢驗檢測工作 8 年及以上可視為具有同等能力。

    5.2.2 應對工作人員定期進行持續技能培訓和重新確認,并提供記錄。如:每 12 個月至少 1 次技能確認,在一個認可周期內,對主要檢測和技術管理人員的確認內容應覆蓋其所從事技術工作的全部內容。

    5.2.5 當檢測人員或授權簽字人職責變更或離開崗位 6 個月以上再上崗,應重新考核確認。

    5.3 設施和環境條件

    5.3.3 對實驗室設施的要求以能獲得準確可靠的檢測結果為重要依據。實驗室總體布局和各部位的安排應減少潛在的對樣品的污染和對人員的危害,原則上應設分隔開的工作區域,包括(但不限于):試劑配制與貯存區、核酸提取區、核酸擴增區和擴增產物分析區。各功能區使用面積應能夠保證合理安放儀器設備和符合相應業務工作的需求,功能區間實現有效隔離。各區域應有明確的標識,避免不同工作區域內的設備、物品混用。必要時應實現樣品在工作區內的單向流動。進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向順序,即只能從試劑配制與貯存區、核酸提取區、核酸擴增區至擴增產物分析區,避免發生交叉污染。在不同的工作區域應使用有明顯區別標志的工作服,以便于鑒別。此外,當工作者離開工作區時,不得將各區域特定的工作服帶出。實驗室的清潔應按試劑制備與貯存區至擴增產物分析區的方向進行。不同的實驗區域應有其各自的清潔用具,不得混用,以防止交叉污染。

    5.3.4 實驗室應有限制進入的措施,應控制非實驗人員進入或使用可能會影響檢驗質量的區域。應采取適當的措施保護樣品及環境,防止未授權者訪問。適用時,實驗室應為進入實驗室的人員提供有效的生物安全防護。

    5.3.5 實驗室應有妥善處理廢棄樣品和有害廢棄物的設施和制度。如用到某些可致基因突變和/或有毒物質如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或同位素等,應注意實驗人員的安全防護。

    5.4 檢測和校準方法及方法的確認

    5.4.1 實驗室應明確檢測方法的適用范圍,如有些轉基因檢測方法規定樣品只能是未加工的或者進行了加工但未污染其他物種 DNA 的樣品,實驗室用此方法進行認可時應該充分認識到這些限制。必要時,操作指導書應規定檢測結果的判定方法、判定依據、判定結果等的表述,包括對過程產物的確認要求。注:如在進行下一步操作時,前一步結果(產物)應該進行驗證和判定,并對判定結果進行處理。

    5.4.7 數據控制

    5.4.7.2 b) 實驗室應建立并實施數據保護的程序,對數據輸入或采集、數據存儲、數據轉移和數據處理的方法、備份方式、數量和時間、殺毒方式進行規定,并定期核查,以確保數據的真實性、完整性、保密性和安全性。同時,實驗室應將以圖像形式(如電泳圖)保存的數據資料納入到數據保護程序中。

    5.5 設備

    5.5.2 對于沒有檢定、校準規程,但需出具檢測數據的儀器設備,實驗室應根據隨機說明書和有關技術資料確定可接受標準、維護和驗證的程序及頻次。

    5.5.6 基因擴增檢驗實驗室每一區域都須有專用的儀器設備。各區域儀器設備都必須有明確的標識,以避免設備物品(如微量移液器或試劑等)從其各自的區域內移出,造成不同的工作區域間的交叉污染。

    5.5.10 微量移液器要定期進行期間核查以保證容積的準確。

    5.6 測量溯源性

    5.6.2.2.2 基因識別結果或鑒定結果應溯源至公認的基因序列。

    5.6.3 基因擴增領域標準物質可包括目標生物(微生物、病毒、寄生蟲、轉基因品系等)、陽性核酸參考物質、質粒/載體等。

    5.7 抽樣

    5.7.1 某些檢測項目涉及特殊取樣,應有保護個人隱私的措施。某些檢測項目實驗室在開始進行檢測前,抽樣人員應熟知檢測項目的要求和影響檢測的因素,保證檢測有效完成。

    5.8 測試和校準物品的處置

    5.8.3 實驗室應根據檢測項目制定樣品的接收條件,明確提出對樣品的要求,列出不符合要求樣品的類型和拒收條件。在接收樣品時,應對其來源、名稱、數量及性狀進行詳細的審查,如發現有異常情況,或與被告知的情況或提供的說明不符時,應及時向委托方問詢、核實,做好記錄并由委托方簽字確認。針對物種鑒定方面,樣品的物理特性(包括外觀,氣味,紋理等)可能有助于識別樣品的物種來源,應在基因擴增測試之前進行這些檢驗,且應記錄所有相關的信息。如果物理特性的分析結果與聲稱的物種不匹配,實驗室應要求客戶說明原因。

    5.8.4 由于檢測目的不同,樣品會被分裝或轉移。因此,實驗室應提供操作程序,以保證樣品滿足檢測要求。特殊樣品還需冷凍、避光保存保證樣品中核酸的完整性。實驗室應有程序規定過程/中間樣品的保存和使用要求,例如從樣品中提取的核酸、基因擴增反應產物等中間樣品的保存和使用。

    5.9 檢測和校準結果質量的保證

    5.9.1 a)實驗室應制訂質量控制計劃,對外部質量控制和內部質量控制活動的實施內容、方式、責任人等作出明確的規定;對內部質量控制活動,計劃中還應給出結果評價依據。

    b)如果檢測方法中規定了內部質量控制計劃和程序,包括規定限值,實驗室應

    嚴格執行。

    c)兩年內,質量控制活動的實施內容應覆蓋獲得認可的全部項目和所有關鍵檢測人員。

    5.10 結果報告

    5.10.1 針對樣品摻假檢測,如果檢測方法中給出了檢出限,則無論結果是“檢出”還是“未檢出”,在報告中均應注明方法的檢出限。針對轉基因檢測,報告中應詳細給出靶序列類型,如“35S 啟動子:檢出”或“抗草甘膦轉基因:未檢出”或“Bt-176:未檢出”,而不應該僅僅報告“不含轉基因成分”,后者的表述會造成所有轉基因成分都已檢測的歧義。

    5.10.2.f) 如果由于提取核酸的質量或數量不足或其他技術原因,不能得出結論,應在報告中明確指出。

    6.1 HOKLAS_SC-21 HOKLAS Supplementary Criteria No. 21 “Food” – Detection and quantification of

    Genetically Modified Organisms (GMO) in food by Polymerase Chain Reaction (PCR) 5 November 2008.

    6.2 HOKLAS SC-43 HOKLAS Supplementary Criteria No. 43 “Food” test category – Species Identification

    by DNA Sequencing for Authentication Purpose 25 July 2011.

    6.3 NATA Biological Testing ISO/IEC 17025 Application Document Annex D: Accreditation of facilities testing

    for genetically modified organisms (GMO) March 2013.

    6.4 GB/T 19495.1-2004 轉基因產品檢測 通用要求和定義.

    6.5 GB/T 19495.2-2004 轉基因產品檢測 實驗室技術要求.

    6.6 SN/T 2102.1-2008 食源性病原體 PCR 檢測技術規范第1部分:通用要求和定義.

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