實時熒光定量pcr儀,國產品牌性能優越,歡迎在線選購!
PCR儀 > 常見問題

常見問題

PCR應用:PCR產物表達中提高忠實性

作者:熒光定量PCR儀???發布時間:2021-11-13

    包括克隆和效率分析,PCR產物表達或定點突變在內的PCR應用都需要高忠實性的PCR。Taq DNA聚合酶被看做是低忠實性的聚合酶,因為其缺少3'到5'外切核酸酶(校正)活性。使用帶有3'到5'外切核酸酶活性的熱穩定聚合酶可以提高忠實性。但是這些聚合酶的產量比Taq DNA聚合酶低。Platinum Pfx DNA聚合酶明顯比Taq DNA聚合酶忠實性高,而且帶有Platinum產品產量和特異性高的優點(圖1)。
    提高忠實性pvr

    圖1. Platinum? Pfx Taq DNA聚合酶的高靈敏度和特異性

    使用人thrombospondin的1.1kb片段的探針對基因組DNA(泳道1到6分別為100,50,10,5,1和0ng)擴增35個循環。A組,使用1單位Platinum Pfx Taq DNA聚合酶,在室溫配制反應液。B組,使用2.5單PfuTurbo? DNA聚合酶,在冰上配制反應液。C組,使用1單位Taq DNA聚合酶,在冰上配制反應液。

    酶混合物

    將Taq DNA聚合酶同帶有3'到5'外切核酸酶活性第二種聚合酶混合在一起可以獲得比單獨Taq DNA聚合酶高的忠實性,并可以得到高產量及擴增長模板。Gibco BRL高保真酶混合物,Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity忠實性是單獨Taq DNA聚合酶的6倍,并可以最高擴增到12kb。

    其他參數

    除了酶,高濃度的dNTP或鎂離子會降低忠實性。將dNTP的濃度從200μM降低到25-50μM可以增加精確度。如果四種核苷的濃度不同,忠實性會受影響。進行較少的PCR循環也會有助于增加忠實性,因為增加循環數目和產物長度就會增加突變可能性。

和小姪女做很舒服_久久精品国产网红主播_中文字幕人成乱码熟女免费_成人a毛片免费播放_午夜五级a片 <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <蜘蛛词>| <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链> <文本链>